Revvity, 64JAK1Y10PEH, kit de detección de fosfo-JAK1 humana HTRF (Tyr1034/1035), 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
JAK1 (Janus quinasa 1) pertenece a la familia de tirosina quinasas Janus no receptoras, junto con JAK2, JAK3 y TYK2. Una amplia gama de citocinas y factores de crecimiento (IL6, IL4, IFNalfa, GM-CSF) unidos a sus receptores inducen la fosforilación de las JAK. Las JAK activadas posteriormente fosforilan dianas adicionales, incluyendo tanto los receptores de citocinas como los sustratos principales: las STAT. La señalización JAK/SAT estimula la proliferación, diferenciación, migración y apoptosis celular. La alteración de la señalización JAK/Stat para reducir las respuestas proinflamatorias inducidas por citocinas representa una diana atractiva para las terapias antiinflamatorias.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-JAK1 (Tyr1034/1035)
El ensayo Phospho-JAK1 (Tyr1034/1035) mide la JAK1 fosforilada en Tyr1034/1035. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Phospho-JAK1 (Tyr1034/1035) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y proporciona un medio para evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas para fosfo-JAK1 (Tyr1034/1035)
El protocolo de 2 placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF de Fosfo-JAK1 (Tyr1034/1035). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de fosfo-JAK1 (Tyr1034/1035) en una placa
La detección de JAK1 fosforilada (Tyr1034/1035) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Compatible con automatización: Sí
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 2, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica-Inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo