Revvity, 64KKAS6PEH, kit de detección de fosfo-IκKα humana HTRF (Ser176/180), 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
El inhibidor de la subunidad alfa de la quinasa del factor nuclear kappa-B (IKKα), también conocido como IKK1, es una proteína quinasa codificada por el gen humano CHUK. IKKα forma parte del complejo de la quinasa IβB (IKK), compuesto por las subunidades catalíticas IKKα e IKKβ y la subunidad reguladora moduladora esencial de NF-βB (NEMO, IKKγ).
La activación del complejo IKK depende de la fosforilación de IKKβ (Ser177/180) o IKKα (Ser176/Ser 180), lo que resulta en un cambio conformacional complejo y la activación de la quinasa. IKKα es un regulador clave de la vía NF-κB, dependiente de varios factores proinflamatorios, como la interleucina-1, el factor de necrosis tumoral alfa (TNFα) y los agonistas del receptor tipo Toll. Si bien IKKα e IKKβ presentan una alta homología, con más del 50 % de similitud estructural, presentan diferentes sustratos dependientes y funciones que no se solapan.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-IKKα (Ser176/180)
El ensayo Phospho-IKKα (Ser176/180) mide la fosforilación de IKKα en Ser176 y Ser180. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Phospho-IKKα (Ser176/180) utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados y que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-IKKα (Ser176/180)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-IKKα (Ser176/180). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfo-IKKα (Ser176/180)
La detección de IKKα fosforilada (Ser176/180) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo