Revvity, 64KKATPEG, kit de detección de IκKα total humana HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
El inhibidor de la subunidad alfa de la quinasa del factor nuclear kappa-B (IKKα), también conocido como IKK1, es una proteína quinasa codificada por el gen humano CHUK. IKKα forma parte del complejo de la quinasa IβB (IKK), compuesto por las subunidades catalíticas IKKα e IKKβ y la subunidad reguladora moduladora esencial de NF-βB (NEMO, IKKγ).
La activación del complejo IKK depende de la fosforilación de IKKβ (Ser177/180) o IKKα (Ser176/Ser 180), lo que resulta en un cambio conformacional complejo y la activación de la quinasa. IKKα es un regulador clave de la vía NF-κB, dependiente de varios factores proinflamatorios, como la interleucina-1, el factor de necrosis tumoral alfa (TNFα) y los agonistas del receptor tipo Toll. Si bien IKKα e IKKβ presentan una alta homología, con más del 50 % de similitud estructural, presentan diferentes sustratos dependientes y funciones que no se solapan.
Cómo funciona
Principio del ensayo de IKKα total
El ensayo Total IKKα cuantifica el nivel de expresión de IKKα en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total IKKα utiliza dos anticuerpos marcados, uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de IKKα en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de IKKα total
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total IKKα HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de IKKα total
La detección de IKKα total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 4
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo