Revvity, 64KRASWTPEH, kit de unión HTRF KRAS WT/SOS1, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Una forma rápida y sencilla de identificar nuevos inhibidores de las interacciones entre las proteínas KRAS WT y SOS1. KRAS es una pequeña GTPasa implicada en diversos procesos biológicos, como la proliferación, la supervivencia y el metabolismo celular. Se sabe que este protooncogén muta en muchos subtipos de cáncer, lo que induce una proliferación descontrolada y modificaciones del metabolismo celular. Por lo tanto, contribuye al efecto Warburg en las células cancerosas. Al igual que la mayoría de las pequeñas GTPasas, KRAS se une al GDP en su forma inactiva o al GTP para cambiar a la forma activa. KRAS G12C es una de las formas mutantes más comúnmente representadas en el cáncer, lo que conduce a un estado permanentemente activo de KRAS. El factor de intercambio de nucleótidos de guanina Ras, también llamado SOS1, es una proteína GEF que promueve la forma activa de KRAS. La sobreexpresión de la interacción KRAS/SOS1 conduce a fenotipos cancerosos.
Cómo funciona
Principio del ensayo
El ensayo PPI de KRAS WT/SOS1 incluye parejas recombinantes humanas marcadas (KRAS WT y SOS1) y reactivos antimarca marcados para la detección de HTRF. Sin un inhibidor, KRAS WT cargado con GTP se une a SOS1, y la unión de cada reactivo de detección a su diana marcada genera una señal de HTRF. En presencia de inhibidores de KRAS WT/SOS1 o competidores de GTP, la señal de HTRF disminuye.

Protocolo de ensayo
El ensayo de unión de KRAS humano WT/SOS1 puede realizarse en una placa blanca de bajo volumen de 96 o 384 pocillos (20 µL final). Como se describe aquí, los compuestos o estándares se dispensan directamente en la placa de ensayo; a continuación, se añaden el GTP premezclado y la proteína Tag1-KRAS humana WT junto con la proteína Tag2-SOS1 humana. A continuación, se dispensan los reactivos HTRF: el anticuerpo anti-Tag2 marcado con criptato de terbio y el anticuerpo anti-Tag1 marcado con XL665. Los reactivos marcados con fluoróforos HTRF pueden premezclarse y añadirse en un solo paso de dispensación. No se requieren lavados. El protocolo puede miniaturizarse o ampliarse aún más simplemente ajustando proporcionalmente el tamaño de cada volumen añadido. Interacción entre la aplicación y la proteína.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 2 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Ensayo de unión de clase objetivo
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo