Revvity, 64LC3B2PEG, kit de detección de LC3B II HTRF para humanos y ratones, 500 puntos de ensayo

Descripción general
LC3 es un homólogo en mamíferos de la proteína ATG8 de levadura y se distribuye en tejidos y células cultivadas de mamíferos. LC3 es un componente clave del proceso de autofagia, un programa de degradación que mantiene la homeostasis celular.
Durante la autofagia, los autofagosomas engullen componentes citoplasmáticos como las proteínas y orgánulos citosólicos. Simultáneamente, una forma citosólica de LC3 (LC3-I) se conjuga con fosfatidiletanolamina para formar el conjugado LC3-fosfatidiletanolamina (LC3-II). Este conjugado recién formado se recluta hacia las membranas autofagosómicas. La posterior fusión de los autofagosomas con los lisosomas da como resultado la formación de autolisosomas, y los componentes intraautofagosómicos son degradados por las hidrolasas lisosómicas. Al mismo tiempo, se degrada LC3-II dentro del lumen autolisosomal.
Se ha descubierto que el nivel de LC3-II es proporcional a la abundancia de autofagosomas, lo que convierte a LC3-II en el marcador más popular de autofagia.
Cómo funciona
Principio del ensayo LC3B-II
El ensayo HTRF LC3B-II cuantifica el nivel de expresión de LC3B-II en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo LC3B-II utiliza dos anticuerpos marcados, uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de LC3B-II en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas LC3B-II
El protocolo de 2 placas implica el cultivo celular en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección LC3B-II HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa LC3B-II
La detección de LC3B-II con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Cuantificación de proteínas.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Biomarcadores de clase objetivo
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo