Revvity, 64LRRKS1PEH, kit de detección de fosforilación humana HTRF-LRRK2 (Ser1292), 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
La quinasa 2 rica en leucina (LRRK2) es una proteína multidominio que fosforila un subconjunto de las GTPasas Rab. La vía LRRK2/Rab opera en la interfaz entre el tráfico vesicular, la función lisosomal y la autofagia, por lo que desempeña un papel crucial en la respuesta inmunitaria y la neuroinflamación. La autofosforilación de Ser1292 sirve como indicador de la actividad de la quinasa LRRK2. Mutaciones patógenas de LRRK2, como la mutación común G2019S, aumentan la actividad de la quinasa LRRK2, lo que resulta en una proteína hiperactiva tóxica que contribuye al fenotipo de la enfermedad de Parkinson (EP). Por consiguiente, los inhibidores y degradadores de LRRK2 se consideran agentes terapéuticos prometedores.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-LRRK2 (Ser1292)

El ensayo Phospho-LRRK2 (Ser1292) mide la fosforilación de LRRK2 en Ser1292. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. Utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad para reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína conduce a la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosforilación LRRK2 (Ser1292)

El protocolo de dos placas implica el cultivo celular en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir el tampón de activación y, a continuación, los reactivos de detección HTRF Phospho-LRRK2 (Ser1292). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células. Aplicación: Señalización celular.
Compatible con automatización: Sí
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 4
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Objetivo-LRRK2
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica-Neurociencia
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo