Revvity, 64LRRKTPEG, kit de detección total de LRRK2 en humanos y ratones HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
La quinasa 2 rica en leucina (LRRK2) es una proteína multidominio que fosforila un subconjunto de las GTPasas Rab. La vía LRRK2/Rab opera en la interfaz entre el tráfico vesicular, la función lisosomal y la autofagia, por lo que desempeña un papel crucial en la respuesta inmunitaria y la neuroinflamación. La autofosforilación de Ser1292 sirve como indicador de la actividad de la quinasa LRRK2. Mutaciones patógenas de LRRK2, como la mutación común G2019S, aumentan la actividad de la quinasa LRRK2, lo que resulta en una proteína hiperactiva tóxica que contribuye al fenotipo de la enfermedad de Parkinson (EP). Por consiguiente, los inhibidores y degradadores de LRRK2 se consideran agentes terapéuticos prometedores.
Cómo funciona
Principio del ensayo LRRK2 total

El ensayo Total LRRK2 cuantifica el nivel de expresión de LRRK2 en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total LRRK2 utiliza dos anticuerpos marcados, uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de LRRK2 en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas para LRRK2 total

El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Total LRRK2. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa para LRRK2 total

La detección de LRRK2 total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Compatible con automatización: Sí
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 4
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Objetivo-LRRK2
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica-Neurociencia
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo