Revvity, 64METY34PEH, kit de detección de fosfo-MET humano HTRF (Thr1234/1235), 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
c-MET, también llamada tirosina-proteína quinasa (MET) o receptor del factor de crecimiento hepatocitario (HGFR), es una proteína humana codificada por el gen MET con actividad tirosina quinasa. Actúa como receptor de tirosina quinasa, con funciones relacionadas con la cicatrización de heridas, la organogénesis y el desarrollo embrionario.
MET se expresa en las células epiteliales y se activa por los factores de los hepatocitos HGF y HSF, con ramificaciones en varias vías como la señalización RAS-MAPK, AKT y STAT3.
La activación anormal de MET se relaciona con la progresión del cáncer, con efectos sobre el crecimiento tumoral, la angiogénesis y la migración e invasión de células tumorales. Estas relaciones entre MET y células tumorales se observan en múltiples tipos de cáncer (hígado, cerebro, mama, riñón, etc.) y se sospecha que se originan por un secuestro de MET y la regulación de la expresión de su ligando, lo que conduce a su sobreexpresión y a su activación autocrina.
Cómo funciona
Principio del ensayo HTRF Phospho MET Tyr1234/1235
El ensayo HTRF Fosfo MET Tyr1234/1235 mide la fosforilación de MET en la tirosina 1234/1235. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. Utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad para reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo entre los dos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas HTRF Phospho MET Tyr1234/1235
El protocolo de 2 placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Phospho MET Tyr1234/1235 HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa HTRF Phospho MET Tyr1234/1235
La detección de MET Tyr1234/1235 fosforilada con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 2
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo