Revvity, 64MK4PEH, kit de detección de fosfo-MKK4 humana HTRF (Ser257), 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo celular HTRF cuantifica de forma práctica y precisa la fosforilación de MKK4 (Proteína Quinasa Activada por Mitógeno 4) en Ser257. La fosforilación de MKK4 en la serina 257 es inducida por diversas MKKKinasas, como TAK1, Tpl2 o ASK1, en respuesta al estrés celular y a las citocinas proinflamatorias. Una vez fosforilada, MKK4 desencadena preferentemente la activación de JNK, que regula diversos procesos biológicos implicados en la tumorigénesis, los trastornos neurodegenerativos y la fibrosis.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-MKK4 (Ser257)
El ensayo Phospho-MKK4 (Ser257) mide la fosforilación de MKK4 en Ser257. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. Utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se selecciona por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados y que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-MKK4 (Ser257)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF de Fosfo-MKK4 (Ser257). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfo-MKK4 (Ser257)
La detección de MKK4 fosforilada (Ser257) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica: NASH/Fibrosis, neurociencia, oncología e inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo