Revvity, 64MLKLTPEG, kit de detección de MLKL total humano HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo celular Total-MLKL monitoriza la MLKL total y puede utilizarse como ensayo de normalización con el kit Phospho-MLKL (Ser358). Este kit es compatible con los tampones del kit phospho-MLKL, por lo que el mismo lisado puede utilizarse para analizar tanto las poblaciones de proteínas fosforiladas como las totales.
La proteína similar al dominio quinasa de linaje mixto (MLKL) es un mediador clave de la muerte celular apoptótica y necrótica, así como de las vías inflamatorias derivadas del TNFR1 y otros receptores. MLKL es fosforilada en la serina 358 por RIPK3 y se considera un biomarcador del inicio de la necroptosis dependiente de RIPK1/RIPK3.
La necroptosis es una vía de muerte celular necrótica programada, también llamada «muerte celular inflamatoria», estrechamente asociada con patologías como las enfermedades inflamatorias y neurodegenerativas, así como el cáncer. Por lo tanto, la MLKL se ha convertido en una importante diana farmacológica para la industria farmacéutica. Las estrategias terapéuticas consisten en desarrollar inhibidores específicos de quinasas de moléculas pequeñas, como las conocidas necrostatina-1 y las necrostatinas-1.
Cómo funciona
Principio del ensayo de MLKL total
El ensayo HTRF Total-MLKL cuantifica el nivel de expresión de MLKL en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total-MLKL utiliza dos anticuerpos marcados: uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de MLKL en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de MLKL total
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-MLKL HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de MLKL total
La detección de MLKL total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Compatible con automatización: Sí
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 4
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica-Inflamación Neurociencia Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo