Revvity, 64MPKPEG, kit de detección de fosfo-AMPK (Thr172) humana y de ratón HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
La proteína quinasa activada por AMP (AMPK) en el extremo 5' se considera un interruptor metabólico maestro. AMPK se activa mediante la fosforilación en Thr172 por CaMKK2 y LKB1, entre otros. Tras su activación, inhibe la síntesis de ácidos grasos, colesterol y triglicéridos, y activa la captación de ácidos grasos y la ß-oxidación, además de estimular la captación de glucosa. AMPK también participa en la activación de la autofagia mediante la fosforilación directa de ULK1. El kit HTRF homogéneo basado en células de Revvity, fosfo-AMPK (Thr172), permite la detección cuantitativa de la modulación de la proteína quinasa activada por AMP, fosforilada en la treonina 172.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-AMPK (Thr172)
El ensayo Fosfo-AMPK (Thr172) mide la AMPK cuando se fosforila en Thr172. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Fosfo-AMPK (Thr172) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se selecciona por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados y que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas de fosfo-AMPK (Thr172)
El protocolo de 2 placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, a continuación, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF de Fosfo-AMPK (Thr172). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de fosfo-AMPK (Thr172) en una placa
La detección de AMPK fosforilada (Thr172) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica: Metabolismo/Diabetes EHNA/Fibrosis
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo