Revvity, 64N62PEG, kit de detección de p62 total (SQSTM1) humano y de ratón HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo celular HTRF monitoriza de forma práctica y precisa el nivel de expresión de las proteínas p62/SQSTM1, tanto fosforiladas como no fosforiladas. Utiliza los mismos tampones que nuestro kit Phospho-p62/SQSTM1 y permite el análisis de proteínas fosforiladas y totales de una sola muestra, lo que constituye un indicador clave de la vía de la autofagia. La autofagia es un mecanismo celular que permite la eliminación de proteínas u orgánulos anormales y desempeña un papel en el cáncer, las enfermedades neurodegenerativas, así como las enfermedades cardiovasculares e infecciosas.
p62/SQSTM1 es una proteína de unión a la ubiquitina y actúa como puente entre la proteína de carga poliubiquitinada y los autofagosomas. p62 interactúa directamente tanto con la proteína de carga como con una proteína llamada LC3, que participa en la formación del autofagosoma. Finalmente, la vía de autofagia activada promueve la degradación de las cargas proteicas ubiquitinadas asociadas a p62.
Cómo funciona
Principio del ensayo p62/SQSTM1 total
El ensayo Total-p62/SQSTM1 cuantifica el nivel de expresión de p62 en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total-p62/SQSTM1 utiliza dos anticuerpos marcados, uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de p62/SQSTM1 en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas Total-p62/SQSTM1
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen (HTRF 384-lv o 96-lv) antes de añadir los reactivos de detección HTRF Total-p62/SQSTM1. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una sola placa para Total-p62/SQSTM1 (Ser403)
La detección de p62/SQSTM1 total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área Terapéutica - Enfermedades Cardiovasculares Infecciosas Neurociencia Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo