Revvity, 64NACPEG, kit de detección de ACC total en humanos y ratones HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
La ACC (acetil-CoA carboxilasa) es un importante regulador del metabolismo de los ácidos grasos. Al catalizar la carboxilación de acetil-CoA a malonil-CoA, la ACC sirve como un nuevo biomarcador o diana farmacológica en la investigación de la diabetes y la obesidad. La actividad enzimática de la ACC se inhibe por la fosforilación del residuo Ser-79.
Al igual que varios genes implicados en la regulación de los ácidos grasos, la transcripción de los genes ACC está estrechamente regulada por el factor de transcripción SREBP1c. Al activarse, este factor de transcripción se une a la secuencia de ADN de SRE aguas arriba del promotor del gen ACC y activa su transcripción. Por lo tanto, la detección cuantitativa del ACC total representa una valiosa lectura de la activación de la vía SREBP1c.
El ensayo celular HTRF Total ACC monitoriza los niveles de expresión de ACC 1 y ACC 2, y puede utilizarse como ensayo de normalización con el kit HTRF phospho-ACC Ser79. Este kit es compatible con los tampones del kit phospho-ACC, por lo que el mismo lisado puede utilizarse para analizar tanto las poblaciones de proteínas fosforiladas como las totales.
Este ensayo basado en células permite una cuantificación simple pero sensible y eficiente de ACC 1/2 y ofrece una mayor comodidad que los ensayos ELISA o WB.
Cómo funciona
Principio del ensayo ACC total
El ensayo Total-ACC cuantifica el nivel de expresión de ACC en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total-ACC utiliza dos anticuerpos marcados: uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de ACC en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas de Total-ACC
El protocolo de 2 placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total ACC HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de 1 placa de ACC total
La detección de ACC total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica: Metabolismo/Diabetes EHNA/Fibrosis
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo