Revvity, 64NEFPEG, kit de detección de eIF2α total en humanos y ratones HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo celular de EIF2 alfa total monitoriza el EIF2 alfa total y se utiliza como ensayo de normalización con el kit de fosfo-EIF2 alfa. En la EHNA, la acumulación de lípidos en los hepatocitos (esteatosis) induce estrés oxidativo y del RE, lo que resulta en un aumento de fosfo-EIF2 alfa (Ser52). El EIF2 alfa fosforilado reduce la síntesis proteica global y activa el factor de transcripción activador 4 (ATF4), que modula la expresión de genes específicos que participan en la regulación del metabolismo, la absorción de nutrientes, el estado redox celular y la apoptosis.
Cómo funciona
Principio del ensayo de EIF2 alfa total
El ensayo Total-EIF2 alfa cuantifica el nivel de expresión de EIF2 alfa en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total-EIF2 alfa utiliza dos anticuerpos marcados: uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de EIF2 alfa en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas de Total-EIF2 alfa
El protocolo de 2 placas implica el cultivo celular en una placa de 96 pocillos antes de la lisis. Posteriormente, se transfieren los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total EIF2 alpha HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de Total-EIF2 alfa
La detección de EIF2 alfa total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica: Metabolismo/Diabetes EHNA/Fibrosis
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo