Revvity, 64NFTPEH, kit de detección de NF-κB total en humanos y ratones HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
El kit de NFkB total sirve como ensayo de normalización con nuestros kits Fosfo-NFkB. El NFkB (factor nuclear kappa B) es de gran interés en la investigación del cáncer y es clave en la respuesta inflamatoria. Los tampones de los ensayos HTRF de fosfo y NFkB total son compatibles, lo que permite el análisis de las poblaciones de proteínas fosforiladas y totales de una sola muestra de lisado.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de NFkB total
El ensayo Total-NFkB cuantifica el nivel de expresión de NFkB en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total-NFkB utiliza dos anticuerpos marcados: uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de NFkB en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de proteínas en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas de NFkB total
El protocolo de 2 placas implica el cultivo celular en una placa de 96 pocillos antes de la lisis. Posteriormente, se transfieren los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF de NFκB total. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de NFkB total en una placa
La detección de NFkB total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 3, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica: NASH/Fibrosis, neurociencia, oncología e inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo