Revvity, 64NPMT1PEG, kit de detección de fosfo-NPM1 (Thr199) humana y de ratón HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
NPM1 (Nucleofosmina 1) es una chaperona molecular que participa en la regulación del ciclo celular, la biogénesis de ribosomas, la proliferación celular, la reparación del daño al ADN y la apoptosis. Su fosforilación en Thr199 por el complejo CDK2/Ciclina E regula la mitosis, la duplicación del centrosoma, el procesamiento del pre-ARNm y la detención del ciclo celular G2/M mediante su interacción con p53/MDM2.
NPM1 funciona como oncogén y supresor tumoral. Con frecuencia se sobreexpresa, se altera, se reorganiza o se elimina esporádicamente en cánceres humanos. NPM1 es también el gen con mayor frecuencia de mutación (NPM1c) en la leucemia mieloide aguda (LMA).
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-NPM1 (Thr199)

El ensayo Phospho-NPM1 (Thr199) mide la fosforilación de NPM1 en Thr199. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. Utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad para reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína conduce a la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-NPM1 (Thr199)

El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-NPM1 (Thr199). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfo-NPM1 (Thr199)

La detección de NPM1 fosforilada (Thr199) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Compatible con automatización: Sí
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 4
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Objetivo-NPM1
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área Terapéutica-Oncología
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo