Revvity, 64NPMTPEH, kit de detección total de NPM1 en humanos y ratones HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
NPM1 (Nucleofosmina 1) es una chaperona molecular que participa en la regulación del ciclo celular, la biogénesis de ribosomas, la proliferación celular, la reparación del daño al ADN y la apoptosis. Su fosforilación en Thr199 por el complejo CDK2/Ciclina E regula la mitosis, la duplicación del centrosoma, el procesamiento del pre-ARNm y la detención del ciclo celular G2/M mediante su interacción con p53/MDM2.
NPM1 funciona como oncogén y supresor tumoral. Se sobreexpresa, altera, reorganiza o elimina esporádicamente con frecuencia en cánceres humanos. NPM1 es también el gen con mayor frecuencia de mutación (NPM1c) en la leucemia mieloide aguda (LMA).
Cómo funciona
Principio del ensayo NPM1 total

El ensayo Total NPM1 cuantifica el nivel de expresión de NPM1 en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total NPM1 utiliza dos anticuerpos marcados, uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de NPM1 en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de NPM1 total

El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Total NPM1. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de NPM1 total

La detección de NPM1 total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Compatible con automatización: Sí
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 4
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Objetivo-NPM1
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área Terapéutica-Oncología
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo