Revvity, 64NRF2TPEH, kit de detección de NRF2 total en humanos y ratones HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo de detección de NRF2 humano/ratón HTRF monitorea la expresión de NRF2 en NRF2 endógeno en varias células.
La sobreproducción de especies reactivas de oxígeno (ROS) genera estrés oxidativo en las células. NRF2 está bajo el control de KEAP1. Bajo estrés celular, NRF2 se fosforila, lo que permite su liberación de la proteína KEAP1. Posteriormente, NRF2 se transloca al núcleo. El factor de transcripción Nrf2 activa la transcripción de varios genes citoprotectores, incluyendo p62SQSTM1, que se han relacionado con la protección contra el cáncer y el TND.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo HTRF de NRF2 total en humanos y ratones
El ensayo HTRF Human/Mouse Total NRF2 cuantifica el nivel de expresión de NRF2 en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Human Total NRF2 utiliza dos anticuerpos marcados, uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de NRF2 en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de NRF2 total en humanos y ratones
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección de HTRF NRF2 total humano/ratón. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de NRF2 total en humanos y ratones
La detección de NRF2 humano con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo