Revvity, 64NSRPEG, kit de detección de c-Src total en humanos y ratones HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo celular de c-Src total monitoriza la c-Src total y se utiliza como ensayo de normalización con el kit phospho-c-Src. Esta proteína pertenece a la familia de las quinasas Src y comparte un alto grado de identidad de secuencia con las otras diez. Esta proteína es una tirosina quinasa asociada a la membrana, no receptora. Su autofosforilación en el residuo Tyr419 indica su activación completa. La quinasa c-Src se sobreexpresa y se activa considerablemente en muchos cánceres humanos, lo que la convierte en una diana prometedora para la terapia oncológica.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de c-Src total
El ensayo Total-c-Src cuantifica el nivel de expresión de c-Src en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total-c-Src utiliza dos anticuerpos marcados: uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de c-Src en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de proteínas en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas de c-Src total
El protocolo de 2 placas implica el cultivo celular en una placa de 96 pocillos antes de la lisis. Posteriormente, se transfieren los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-c-Src HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de c-Src total
La detección de cSrc total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo