Revvity, 64P300TPEG, kit de detección de p300 total HTRF en humanos y ratones, 500 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo celular Total p300 detecta de forma cómoda y precisa los niveles de Total p300 en las células. Este kit es compatible con los tampones del kit Total CREBBP, por lo que el mismo lisado puede utilizarse para analizar ambos miembros de la familia.
p300 (también llamado EP300 o KAT3B) y su parálogo CREBBP (proteína de unión a CREB, también conocida como CBP o KAT3A) son coactivadores transcripcionales clave. Estas lisina acetil transferasas (KAT) forman la familia KAT3, compuesta por dos miembros. Controlan la transcripción génica facilitando el ensamblaje de la maquinaria transcripcional y acetilando residuos específicos de lisina en histonas centrales y correguladores de la transcripción. p300 y CREBBP actúan como "centros de conexión" de la red, con más de 400 proteínas que regulan la expresión de genes que controlan diversos procesos celulares básicos, como la proliferación y la homeostasis.
Las mutaciones o translocaciones cromosómicas que involucran p300/CREBBP conducen a una desregulación genética y pueden provocar una variedad de enfermedades humanas, como cáncer, neurodegeneración y enfermedades inflamatorias. Recientemente se han desarrollado degradadores de p300/CREBBP PROTAC para el tratamiento de cánceres humanos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de p300 total
El ensayo Total p300 cuantifica el nivel de expresión de p300 en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total p300 utiliza dos anticuerpos marcados, uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de p300 en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de p300 total
El protocolo de 2 placas implica el cultivo celular en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Total p300. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de p300 total
La detección de p300 total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo