Revvity, kit de detección de 64P38PEG, HTRF de fosforilación humana y de ratón MAPK (Thr180/Tyr182), 500 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo celular HTRF cuantifica de forma práctica y precisa la p-38-MAPK fosforilada en Thr180/Tyr182. Este kit tiene aplicaciones en la investigación sobre inflamación, respuesta inmunitaria y oncología. Gracias a un protocolo optimizado, compatible con formatos de bajo volumen, este kit puede utilizarse desde la investigación básica hasta el cribado de fármacos de alto rendimiento.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-p38 MAPK (Thr180/Tyr182)
El ensayo Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) mide la p38 MAPK cuando se fosforila en Thr180/Tyr182. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se selecciona por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo, por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y proporciona un medio para evaluar el estado de fosforilación de las proteínas en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas para fosfo-p38 MAPK (Thr180/Tyr182)
El protocolo de 2 placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, a continuación, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir reactivos de detección HTRF de fosfo-p38 MAPK (Thr180/Tyr182). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa para fosfo-p38 MAPK (Thr180/Tyr182)
La detección de p38 MAPK fosforilada (Thr180/Tyr182) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Enfermedades infecciosas cardiovasculares NASH/Fibrosis Neurociencia Oncología e inflamación
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo