Revvity, 64P62S4PEH, kit de detección de fosfo-p62 (SQSTM1) (Ser403) humana y de ratón HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo celular HTRF cuantifica de forma práctica y precisa la p62/SQSTM1 fosforilada en Ser403. p62/SQSTM1 es una proteína de unión a la ubiquitina que participa en la regulación de la autofagia. Este mecanismo celular permite la eliminación de proteínas u orgánulos anormales y desempeña un papel en el cáncer, las enfermedades neurodegenerativas, así como en las enfermedades cardiovasculares e infecciosas.
p62/SQSTM1 actúa como puente entre la proteína de carga poliubiquitinada y los autofagosomas, interactuando directamente con la proteína de carga y con una proteína llamada LC3, involucrada en la formación de autofagosomas. Recientemente, la activación de p62/SQSTM1 se ha asociado con la fosforilación inducida por ULK1 y mTor en diferentes residuos, como Ser 403.
La vía de autofagia activada promueve la degradación de las cargas de proteínas ubiquitinadas asociadas a p62.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-p62/SQSTM1 (Ser403)
El ensayo Phospho-p62/SQSTM1 (Ser403) de Revvity mide la p62 cuando se fosforila en Ser403. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Phospho-p62 (Ser403) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se selecciona por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo entre los dos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor y, por lo tanto, genera una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-p62/SQSTM1 (Ser403)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen (HTRF 384-lv o 96-lv) antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-p62/SQSTM1 (Ser403). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa para fosfo-p62/SQSTM1 (Ser403)
La detección de p62/SQSTM1 fosforilada (Ser 403) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área Terapéutica - Enfermedades Cardiovasculares Infecciosas Neurociencia Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo