Revvity, 64PARP1TPEH, kit de detección de PARP1 total en humanos y ratones HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
PARP1 (poli(ADP-ribosa) polimerasa 1) es una enzima nuclear que desempeña un papel clave en la reparación del ADN al utilizar NAD⁺ para sintetizar poli(ADP-ribosa) (PAR). Su sobreexpresión en diversos tipos de cáncer contribuye a la progresión tumoral. En células con deficiencias de BRCA1 o BRCA2, la inhibición de PARP1 provoca apoptosis, lo que la convierte en una prometedora diana terapéutica en el tratamiento del cáncer.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de PARP1 total
El ensayo Total PARP1 cuantifica el nivel de expresión de PARP1 en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo utiliza dos anticuerpos marcados, uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de PARP1, esto permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET.
Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína total presente en la muestra y proporciona un medio para evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de PARP1 total
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección de PARP1 total HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de PARP1 total
La detección de PARP1 total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 4
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Objetivo-PARP1
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área Terapéutica-Oncología
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo