Revvity, 64PLCG2Y7PEH, kit de detección de fosfo-PLC-γ2 humana HTRF (Tyr1217), 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo basado en células HTRF detecta de manera conveniente y precisa la fosfolipasa C gamma 2 (PLCgamma 2) fosforilada en Tyr1217.
La PLCgamma 2 es una fosfolipasa específica de fosfoinosítidos que genera segundos mensajeros y desempeña un papel crucial en la transducción de señales, especialmente en células hematopoyéticas como los linfocitos B, mastocitos, macrófagos, linfocitos citolíticos naturales y plaquetas. Tras la estimulación de diferentes receptores, como el receptor de antígeno de linfocitos B (BCR) y los receptores Fc (FcR), la PLCgamma 2 interactúa con diversas proteínas adaptadoras y es fosforilada por tirosina quinasas intracelulares. La fosforilación incluye varios sitios, uno de los cuales es Tyr1217.
La PLCgamma 2 se ha relacionado con diversas patologías como enfermedades autoinmunes e inflamatorias, resistencia a fármacos en el cáncer y neurodegeneración.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-PLCg2 (Tyr1217)
El ensayo Phospho-PLCg2 (Tyr1217) mide la PLCg2 cuando se fosforila en Tyr1217. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad para reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-PLCg2 (Tyr1217)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-PLCg2 (Tyr1217). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa para fosforilación de PLCg2 (Tyr1217)
La detección de PLCg2 fosforilada (Tyr1217) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 2, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Neurociencia Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo