Revvity, 64PLKT2PEH, kit de detección de fosfo-PLK1 (Thr210) humana y de ratón HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo celular HTRF permite la detección rápida y cuantitativa de PLK1 fosforilada en la treonina 210. La quinasa tipo Polo 1 (PLK1) es el miembro principal de la familia de las serina/treonina quinasas, bien conservadas, y es esencial para la división celular (mitosis). Por lo tanto, es un regulador clave del punto de control G2/M del ciclo celular.
Activación de PLK1 para la regulación del ciclo celular: PLK1 se activa mediante fosforilación en Thr210 por la quinasa AurA. La PLK1 activada fosforila CDC25.
PLK1 es una proteína crucial responsable de la mitosis y la progresión del ciclo celular/proliferación celular. Esto la convierte en un objetivo atractivo para el tratamiento del cáncer.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-PLK1 (Thr210)
El ensayo HTRF Phospho-PLK1 (Thr210) mide la PLK1 cuando se fosforila en Thr210. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Phospho-PLK1 (Thr210) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad para reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a los dos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-PLK1 (Thr210)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-PLK1 (Thr210). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfo-PLK1 (Thr210)
La detección de PLK1 total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado.
Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 4
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo