Revvity, 64RAB10TPEH, kit de detección de RAB10 total en humanos y ratones HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
La proteína relacionada con RAS, Rab10 (RAB10), pertenece a la superfamilia RAS de pequeñas GTPasas. RAB10 es un regulador clave del tráfico intracelular a través de la membrana, al orquestar la biogénesis, el transporte, la fijación y la fusión de orgánulos y vesículas unidos a la membrana. La fosforilación mediada por LRRK2 puede causar déficits en las vías de tráfico endolisosomal moduladas por RAB10, lo que contribuye a la aparición de enfermedades neurodegenerativas. RAB10 se asocia con la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo HTRF Total RAB10
El ensayo Total-RAB10 cuantifica el nivel de expresión de RAB10 en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se realiza completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia.
El ensayo Total-RAB10 utiliza dos anticuerpos marcados: uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de RAB10 en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas de Total-RAB10
El protocolo de 2 placas implica cultivar células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y luego transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de agregar los reactivos de detección HTRF Total-RAB10.
Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de Total-RAB10
La detección de RAB10 total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado.
Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 3
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo