Revvity, 64RABT73PEG, kit de detección de fosfo-RAB10 (Thr73) humano y murino HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
La proteína relacionada con RAS, Rab10 (RAB10), pertenece a la superfamilia RAS de pequeñas GTPasas. RAB10 es un regulador clave del tráfico intracelular a través de la membrana, al orquestar la biogénesis, el transporte, la fijación y la fusión de orgánulos y vesículas unidos a la membrana. La fosforilación mediada por LRRK2 puede causar déficits en las vías de tráfico endolisosomal moduladas por RAB10, lo que contribuye a la aparición de enfermedades neurodegenerativas. RAB10 se asocia con la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo HTRF fosfo RAB10
El ensayo Phospho-RAB10 (Thr73) mide RAB10 cuando se fosforila en treonina 73. A diferencia del Western Blot, el ensayo se basa completamente en placas y no requiere geles, electroforesis ni transferencia.
El ensayo Phospho-RAB10 (Thr73) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo entre los dos anticuerpos marcados, que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas HTRF Phospho-RAB10 Thr73
El protocolo de 2 placas implica cultivar células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y luego transferir lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de la adición de los reactivos de detección HTRF fosfo-RAB10 Thr 73.
Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa HTRF Phospho-RAB10 Thr73
La detección de Phospho RAB10 Thr 73 con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado.
Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 3
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo