Revvity, 64RBS807PEG, kit de detección de fosforilación HTRF humana y de ratón (Ser807/811), 500 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo celular HTRF cuantifica de forma práctica y precisa la proteína fosforilada del retinoblastoma en Ser807/811. Rb pertenece a la familia de proteínas de bolsillo y actúa como supresor tumoral, regulando la progresión del ciclo celular. La forma activa subfosforilada de Rb interactúa y reprime la actividad transcripcional de los factores E2F, impidiendo así la transición G0/G1 y la progresión del ciclo celular. En presencia de señales mitogénicas, la ciclina D-CDK4/6, seguida de la ciclina E-CDK2, fosforilan e inactivan secuencialmente a Rb, liberando los factores de transcripción E2F necesarios para la progresión del ciclo celular.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-Rb (Ser807/811)
El ensayo Phospho-Rb (Ser807/811) mide la fosforilación de Rb en ​​Ser807/811. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Phospho-Rb (Ser807/811) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se selecciona por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo entre los dos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor y, por lo tanto, genera una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-Rb (Ser807/811)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen (HTRF 384-lv o 96-lv) antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-Rb (Ser807/811). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfo-Rb (Ser807/811)
La detección de Rb fosforilado (Ser807/811) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo