Revvity, 64RETTPEH, kit de detección de RET total HTRF en humanos y ratones, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo celular Total-RET monitoriza el RET total (isoformas corta y larga) y puede utilizarse como ensayo de normalización con el kit Phospho-RET (pan). Este kit es compatible con los tampones del kit Phospho-RET, por lo que el mismo lisado puede utilizarse para analizar tanto las poblaciones de proteínas fosforiladas como las totales.
El protooncogén RET (Reordenado durante la Transfección), también conocido como c-Ret, es un receptor de tirosina quinasa que se expresa principalmente en dos isoformas de 1072 y 1114 aminoácidos. La activación de RET por los ligandos neurotróficos de la familia (GFL) derivados de la línea celular glial conduce a su dimerización y autofosforilación en residuos intracelulares de tirosina. RET es necesario para el desarrollo del sistema nervioso y de otros tejidos. Se han detectado alteraciones de RET en numerosos cánceres humanos. Por lo tanto, el desarrollo de inhibidores de RET quinasa altamente selectivos y potentes resulta de gran interés para el tratamiento de cánceres con alteraciones de RET. Recientemente, RET también se ha vinculado a la neurodegeneración.
Cómo funciona
Principio del ensayo de RET total
El ensayo HTRF Total-RET cuantifica el nivel de expresión de RET en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total-RET utiliza dos anticuerpos marcados: uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de RET en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de RET total
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-RET HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de RET total
La detección de RET total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Compatible con automatización: Sí
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo