Revvity, 64RIPK1S1PEH, kit de detección de fosfo-RIPK1 humana HTRF (Ser166), 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo celular HTRF detecta de forma cómoda y precisa la RIPK1 66 fosforilada. RIPK1 (proteína quinasa de serina/treonina 1 que interactúa con el receptor, también llamada RIP1 o RIP) es un factor desencadenante de la muerte celular apoptótica y necrótica, así como de las vías inflamatorias asociadas con TNFR1 y otros receptores. La autofosforilación en la serina 166 se considera un biomarcador del inicio de la necroptosis dependiente de RIPK3/MLKL. La vía de muerte celular necrótica programada por la ptosis, también llamada "muerte celular inflamatoria", está estrechamente asociada con patologías como enfermedades inflamatorias y neurodegenerativas, así como con el cáncer. Por lo tanto, se ha convertido en una importante diana farmacológica en la industria farmacéutica. Las estrategias terapéuticas consisten en desarrollar inhibidores específicos de quinasas de moléculas pequeñas, como las conocidas necrostatina-1 y las necrostatinas-1.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-RIPK1 (Ser166)
El ensayo Phospho-RIPK1 (Ser166) mide la RIPK1 cuando se fosforila en Ser166. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se selecciona por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-RIPK1 (Ser166)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-RIPK1 (Ser166). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfo-RIPK1 (Ser166)
La detección de RIPK1 fosforilada (Ser166) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica-Inflamación Neurociencia Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo