Revvity, 64RIPK1TPEH, kit de detección de RIPK1 total humana HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo Total-RIPK1 monitoriza la RIPK1 total y puede utilizarse como ensayo de normalización con el kit Phospho-RIPK1 (Ser166). Es compatible con los tampones de fosfo-RIPK1; el mismo lisado puede utilizarse para análisis tanto de las poblaciones de proteínas fosforiladas como de las totales. La proteína quinasa serina/treonina 1 que interactúa con el receptor (RIP1 o RIP) es un factor desencadenante de la muerte celular apoptótica y necrótica, así como de las vías inflamatorias del TNFR1 y otros receptores. La autofosforilación en la serina 166 se considera un biomarcador del inicio de la necroptosis dependiente de RIPK3/MLKL. La vía de muerte celular necrótica programada por la ribosomas, también llamada "muerte celular inflamatoria", está estrechamente asociada con patologías como enfermedades inflamatorias y neurodegenerativas, así como con el cáncer. Por lo tanto, se ha convertido en un importante objetivo farmacológico en la industria farmacéutica. Las estrategias terapéuticas consisten en desarrollar inhibidores específicos de quinasas de moléculas pequeñas, como las conocidas Necrostatina-1 y Necrostatina-1s.
Cómo funciona
Principio del ensayo Total-RIPK1
El ensayo HTRF Total-RIPK1 cuantifica el nivel de expresión de RIPK1 en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total-RIPK1 utiliza dos anticuerpos marcados: uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de RIPK1 en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas para Total-RIPK1
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-RIPK1 HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa para Total-RIPK1
La detección de Total-RIPK1 con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 3, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica-Inflamación Neurociencia Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo