Revvity, 64RNAP2S2PEG, kit de detección de fosfo-ARN polimerasa II (Ser2) humana y de ratón, HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
La ARN polimerasa II (ARN Pol II) es una de las principales enzimas responsables de la expresión de genes codificantes de proteínas y de algunos ARN nucleares pequeños. El dominio carboxiterminal (CTD) de la ARN Pol II experimenta un ciclo de fosforilación, catalizado principalmente por miembros de la familia de las quinasas dependientes de ciclina (CDK). La fosforilación del CTD de la ARN Pol II le permite acoplar temporalmente la transcripción con los procesos asociados a ella (la especificidad de unión del CTD a factores específicos está determinada por los eventos de fosforilación/desfosforilación específicos del sitio).
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-ARN Pol II (Ser2)
El ensayo Phospho-RNA Pol II (Ser2) mide la RNA Pol II cuando se fosforila en Ser2. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. Utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad para reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína conduce a la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados. Esto acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-ARN Pol II (Ser2)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF de ARN Pol II (Ser2). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfo-ARN Pol II (Ser2)
La detección de ARN polimerasa II (Ser2) fosforilada con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado para HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Cuantificación de proteínas.
Marca-HTRF
Tampón/Tampón de lisis de disolvente 1
Modalidad de detección-HTRF
Especie huésped: ratón humano
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Pol II de ARN diana
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área Terapéutica-Inmuno-oncología Inflamación
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo