Revvity, 64S6KPEH, kit de detección de fosfo-p70 S6K (Thr389) humana y de ratón HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo celular HTRF cuantifica de forma práctica y precisa la p70S6K fosforilada en Thr389. Compatible con la mayoría de los tipos celulares, este kit es la herramienta ideal para el cribado y estudio de compuestos que afectan biológicamente la proliferación, supervivencia, invasión y motilidad celular, así como la señalización del receptor de insulina. El kit tiene aplicaciones en oncología, metabolismo (diabetes, obesidad, envejecimiento), enfermedades cardiovasculares y enfermedades neurodegenerativas.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-p70S6K (Thr389)
El ensayo Phospho-p70S6K (Thr389) mide la p70S6K fosforilada en Thr389. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Phospho-p70S6K (Thr389) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se selecciona por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados y que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de las proteínas en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas de fosfo-p70S6K (Thr389)
El protocolo de 2 placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, a continuación, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF de fosfo-p70S6K (Thr389). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfo-p70S6K (Thr389)
La detección de p70S6K fosforilada (Thr389) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 3
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Metabolismo/Neurociencia de la diabetes
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo