Revvity, 64SH1PEH, kit de detección de fosfo-SHP1 humana HTRF (Tyr564), 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo basado en células está diseñado para monitorear la fosforilación de SHP1 en Tyr564, lo que representa un sello distintivo de su activación.
Muchas células cancerosas sobreexpresan ligandos inhibidores de puntos de control, como PD-L1. PD-L1 se une a su homólogo, el receptor inhibidor de puntos de control PD1, presente en la superficie de los linfocitos T. A su vez, el complejo PD1-PDL1 recluta y activa efectores inhibidores, como SHP1 o SHP2. Estas dos fosfatasas, fosforiladas en Tyr564 ​​y Tyr542 respectivamente por la quinasa Lck, desencadenan la desfosforilación de proteínas de señalización como ZAP-70 o SLP-76, implicadas en la vía de activación de los linfocitos T. Finalmente, SHP1 y SHP2 activados participan en la inactivación de los linfocitos T.
Se cree que prevenir la activación de SHP1 y/o SHP2 mediante inhibidores de moléculas pequeñas contribuye a restablecer la respuesta inmune contra los tumores.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-SHP1 (Tyr564)
El ensayo Phospho-SHP1 (Tyr564) mide la fosforilación de SHP1 en Tyr564. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Phospho-SHP1 (Tyr564) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad para reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-SHP1 (Tyr564)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-SHP1 (Tyr564). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosfo-SHP1 (Tyr564)
La detección de SHP1 fosforilada (Tyr564) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 3, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Enfermedades infecciosas, oncología e inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo