Revvity, 64SKP2TPEG, kit de detección de SKP2 total humano HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
La proteína 2 asociada a la quinasa de fase S (SKP2), también conocida como FBXL1, es un miembro destacado de la familia de proteínas F-box. Funciona como una ligasa E3 principalmente mediante la formación del complejo SCF-SKP2. SKP2 es reconocida por su capacidad para regular el ciclo celular. Puede ubiquitinar diversos reguladores del ciclo celular e inducir su hidrólisis, incluyendo los CKI p21, p27 y p57, así como la proteína E del ciclo celular (ciclina E) y el regulador del ciclo celular c-Myc. Como impulsor de la oncogénesis y la resistencia a fármacos, SKP2 es una diana atractiva para inhibidores de moléculas pequeñas y estrategias de degradación de proteínas destinadas a restaurar los puntos de control del ciclo celular.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o el tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo SKP2 total
El ensayo Total SKP2 mide los niveles de SKP2 en las células. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. Utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína.
En presencia de SKP2, esto permite la formación de un inmunocomplejo que involucra ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína total presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de SKP2 total
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total SKP2 HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa para SKP2 total
La detección de SKP2 total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 4
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Objetivo-SKP2
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área Terapéutica-Inmuno-oncología Oncología
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo