Revvity, 64SMAD2S5PEH, kit de detección de fosfo-SMAD2 (Ser465/467) humana y de ratón HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo basado en células HTRF permite la detección cuantitativa rápida de SMAD2 fosforilado en la serina 465/467, como una lectura de la actividad de señalización de TGF-ß.
Los receptores TGF-ß activan directamente SMAD2 mediante fosforilación en Ser465/467, lo que hace que se trasloque al núcleo y regule la expresión genética involucrada en la apoptosis, la migración y la diferenciación, así como en las respuestas inmunes/inflamatorias y la remodelación de la matriz extracelular.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-SMAD2 (Ser465/467)
El ensayo Fosfo-SMAD2 (Ser465/4267) mide la fosforilación de SMAD2 en Ser465/4267. A diferencia del Western Blot, este ensayo se realiza completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia.
El ensayo Phospho-SMAD2 (Ser465/4267) utiliza dos anticuerpos marcados: uno con un fluoróforo donante y otro con un aceptor. El primer anticuerpo se selecciona por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados y que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de 2 placas de fosfo-SMAD2 (Ser465/467)
El protocolo de 2 placas implica cultivar células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y luego transferir lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de agregar los reactivos de detección HTRF Phospho-SMAD2 (Ser465/467).
Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de 2 placas de fosfo-SMAD2 (Ser465/467)
La detección de SMAD2 fosforilada (Ser465/467) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado.
Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 3, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica: Metabolismo cardiovascular, diabetes, esteatohepatitis no alcohólica (EHNA), fibrosis, oncología e inflamación.
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo