Revvity, 64SMARC2TPEH, kit de detección de SMARCA-2 total humano HTRF, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
El subgrupo de genes SMARCA pertenece a la familia SWI/SNF, implicada en la remodelación de la cromatina y la reparación de daños en el ADN. Los complejos SWI/SNF regulan los genes implicados en procesos esenciales como la replicación del ADN, la reparación de daños y la proliferación celular.
SMARCA4/BRG1 y SMARCA2/BRM son dos subunidades ATPasa catalíticas mutuamente excluyentes del complejo SWI/SNF.
La pérdida de función de SMARCA4 se asocia frecuentemente con el cáncer, y una relación letal sintética entre SMARCA4 y SMARCA2 está bien establecida en los cánceres deficientes en SMARCA4, donde la inactivación de SMARCA2 conduce a la muerte de las células tumorales.
Entre las estrategias terapéuticas que se investigan para combatir el cáncer, se espera que la degradación dirigida de proteínas supere algunas limitaciones de las moléculas pequeñas convencionales. Hasta la fecha, se han desarrollado moléculas PROTAC para inducir la degradación selectiva de las proteínas SMARCA. Sin embargo, SMARCA2 y SMARCA4 comparten aproximadamente un 75 % de identidad a nivel proteico, por lo que es probable que los compuestos se dirijan a ambas proteínas. Por lo tanto, es necesario investigar cuidadosamente la selectividad de los compuestos que se dirigen a SMARCA2 o SMARCA4. En estas investigaciones, el kit HTRF total SMARCA4 es un valioso ensayo complementario al kit HTRF total SMARCA2, lo que permite la elaboración de perfiles de compuestos fiables.
Cómo funciona
Principio del ensayo Total-SMARCA2
El ensayo HTRF Total-SMARCA2 cuantifica el nivel de expresión de SMARCA2 en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total-SMARCA2 utiliza dos anticuerpos marcados: uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de SMARCA2 en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de Total-SMARCA2
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total-SMARCA2 HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa para Total-SMARCA2
La detección de Total-SMARCA2 con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 4
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo