Revvity, 64SYKY525PEG, kit de detección de fosfo-SYK humana HTRF (Tyr525/526), ​​500 puntos de ensayo

Descripción general
Este ensayo basado en células HTRF detecta de forma cómoda y precisa la SYK fosforilada en Tyr525/526. ​​​​​​​
La SYK (tirosina quinasa del bazo) es una tirosina/serina quinasa citoplasmática que desempeña un papel crucial en la transducción de señales, especialmente en células inmunitarias como los linfocitos B, los macrófagos, la microglía (macrófagos residentes en el cerebro), los neutrófilos y los mastocitos. Tras la estimulación celular, la SYK interactúa con los dominios citoplasmáticos de los receptores inmunitarios activados y se une a los motivos fosforilados específicos del receptor (denominados "p-ITAM"), lo que provoca su activación mediante la autofosforilación de su dominio catalítico en Tyr525/526.
La fosforilación de SYK es una lectura de vías inflamatorias clave, como las vías de señalización BCR, FcR y TREM2, que se alteran en diversas patologías, como enfermedades autoinmunes, neurodegeneración, cánceres y trastornos alérgicos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de fosfo-SYK (Tyr525/526)
El ensayo Phospho-SYK (Tyr525/526) mide la SYK cuando se fosforila en Tyr525/526. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se selecciona por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de fosfo-SYK (Tyr525/526)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-SYK (Tyr525/526). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de fosforilación SYK (Tyr525/526)
La detección de SYK fosforilada (Tyr525/526) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 3, tampón de lisis 4, tampón de lisis 5
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Neurociencia Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo