Revvity, 64TIE2Y92PEG, kit de detección de fosforilación humana HTRF (Tyr992), 500 puntos de ensayo

Descripción general
Los kits de ensayo Phospho-Tie están diseñados para la cuantificación robusta de la modulación de Tie, fosforilada en Tyr992, tras la activación de la angiopoyetina. El sencillo protocolo de mezcla y lectura elimina todos los pasos de lavado para un análisis más rápido y resultados de alta calidad.
Tie2 es una tirosina-proteína quinasa presente en las células endoteliales y actúa como receptor de superficie celular para las angiopoyetinas. Desempeña un papel crucial en la regulación de la angiogénesis, la migración celular, la supervivencia, la adhesión y la proliferación, garantizando principalmente la estabilidad y el mantenimiento vascular. En presencia de angiopoyetina 1, los receptores Tie2 forman homodímeros, lo que conduce a la autofosforilación de las colas C-terminales en la tirosina 992 y a la activación de las vías de señalización posteriores.
Cómo funciona
Principio del ensayo Phospho-Tie2 (Tyr992)
El ensayo Phospho-Tie2 (Tyr992) mide la fosforilación de Tie2 en Tyr992. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. Utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET.
Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y proporciona un medio para evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de Phospho-Tie2 (Tyr992)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-Tie2 (Tyr992). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de Phospho-Tie2 (Tyr992)
La detección de Tie2 fosforilado (Tyr992) con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado para HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Objetivo-Tie2
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área Terapéutica-Oncología
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo