Revvity, 64VAV1Y74PEG, kit de detección de HTRF Phospho-VAV1 (Tyr174), 500 puntos de ensayo

Descripción general
VAV1, también conocido como protooncogén Vav 1, es una proteína que desempeña un papel crucial en la señalización celular y la respuesta inmunitaria. Se expresa principalmente en células de origen hematopoyético, como los linfocitos T, los linfocitos B y las células asesinas naturales.
VAV1 actúa como factor de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) para las GTPasas de la familia Rho, incluyendo Rac1, Rac2 y RhoA. VAV1 activa estas GTPasas promoviendo el intercambio de GDP (difosfato de guanosina) por GTP (trifosfato de guanosina) en estas enzimas. Mediante este mecanismo, VAV1 es un importante regulador de procesos celulares esenciales como la reorganización del citoesqueleto, la adhesión celular, la proliferación y la migración.
En las células inmunitarias, VAV1 es un intermediario importante en la señalización descendente de receptores de antígenos especializados, como los receptores de linfocitos T (TCR) y los receptores de linfocitos B (BCR). Por ello, VAV1 se ha relacionado con diversas enfermedades, como el lupus eritematoso sistémico (LES) y la artritis reumatoide (AR), trastornos autoinmunes. En estas afecciones, la señalización anormal de VAV1 puede contribuir a la desregulación inmunitaria y la inflamación. Además, VAV1 está implicado en ciertos tipos de cáncer, donde su activación aberrante puede promover la transformación celular y la metástasis.
Cómo funciona
Principio del ensayo HTRF Human Phospho-Y174 VAV1
El ensayo Phospho-Y174 VAV1 mide la fosforilación de VAV1 en Tyr174. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. Utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, mientras que el segundo por su capacidad de reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína permite la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de una placa para HTRF Human Phospho-Y174 VAV1
La detección de Phospho-Y174 VAV1 con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta.

Protocolo de ensayo de dos placas HTRF Human Phospho-Y174 VAV1
El protocolo de dos placas implica el cultivo celular en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen (HTRF 384-lv o 96-lv) antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-Y174 VAV1. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo