Revvity, 64WEE1TPEG, kit de detección de Wee1 total en humanos y ratones HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
Wee1 es una serina/treonina quinasa que desempeña un papel importante en la regulación del ciclo celular. En respuesta al daño del ADN, la actividad de Wee1 se sobreexpresa para promover la detención del ciclo celular. Wee1 regula el punto de control G2/M del ciclo celular mediante la fosforilación e inactivación de Cdk1. En la fase S, Wee1 fosforila Cdk2, impidiendo que las células pasen a la siguiente fase del ciclo celular hasta que se complete la replicación o reparación del ADN. Wee1 se sobreexpresa en muchos tipos de cáncer y se ha correlacionado con una baja supervivencia libre de enfermedad en pacientes con cáncer. Por lo tanto, la inhibición de Wee1 es un área de investigación activa, especialmente desde la aparición de nuevos enfoques que utilizan PROTAC (quimeras dirigidas a la proteólisis).
Cómo funciona
Principio del ensayo Total Wee1
El ensayo Total WEE1 cuantifica el nivel de expresión de WEE1 en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Total WEE1 utiliza dos anticuerpos marcados, uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de WEE1 en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de Total Wee1
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Total WEE1 HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de Total Wee1
La detección de WEE1 total con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo