Revvity, 64XBPTPEG, kit de detección de XBP1 total humana HTRF, 500 puntos de ensayo

Descripción general
El ensayo de detección de XBP1 humano HTRF monitorea el XBP1 empalmado (XBP1s) así como el XBP1 no empalmado (XBP1u), y se utiliza para detectar la expresión de XBP1 global endógeno o sobreexpresado (XBP1s + XBP1u) en varias células.
Ante el estrés del RE y la acumulación de proteínas desplegadas, BiP libera su unión inhibidora para activar IRE1. El receptor IRE1 se dimeriza y luego se autofosforila, lo que activa su actividad de ARNm. Mediante esta acción, IRE1 empalma el ARNm de XBP-1u a XBP1s, lo que permite su traducción y posterior translocación al núcleo. XBP-1s actúa entonces como factor de transcripción.
Cómo funciona
Principio del ensayo Total XBP1
El ensayo HTRF Human Total XBP1 cuantifica el nivel de expresión de XBP1 (XBP1u + XBP1s) en un lisado celular. A diferencia del Western Blot, el ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. El ensayo Human Total XBP1 utiliza dos anticuerpos marcados, uno acoplado a un fluoróforo donante y el otro a un aceptor. Ambos anticuerpos son altamente específicos para un epítopo específico de la proteína. En presencia de XBP1s o XBP1u en un extracto celular, la adición de estos conjugados acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de la proteína presente en la muestra y permite evaluar la expresión de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de XBP1 total
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Human Total XBP1 HTRF. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de XBP1 total
La detección de XBP1 total humana con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado por HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 1, tampón de lisis 2, tampón de lisis 4
Modificación molecular total
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo