Revvity, 64XIAPB2PEH, kit de unión HTRF de XIAP/BIR2 humano, 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
Una forma rápida y sencilla de identificar y caracterizar nuevos aglutinantes para la proteína XIAP dirigidos al dominio BIR2.
La proteína inhibidora de la apoptosis ligada al cromosoma X (XIAP) pertenece a la familia de las proteínas inhibidoras de la apoptosis (IAP), que también incluye a cIAP1. Es el miembro más potente de la familia de las IAP inhibidoras de caspasas y un regulador negativo de diversos estímulos apoptóticos y vías de muerte.
La sobreexpresión de XIAP en células tumorales es un mediador bien descrito de la resistencia a la quimioterapia en muchos tipos de cáncer y se ha relacionado con la agresividad tumoral, lo que lo convierte en un objetivo atractivo en la terapia contra el cáncer donde se han investigado varias estrategias terapéuticas, como los miméticos de SMAC.
Además, XIAP presenta actividad de ligasa E3 y conduce a la ubiquitinación de proteínas diana y su posterior degradación. Esta propiedad puede aprovecharse mediante una estrategia de quimera dirigida a la proteólisis (PROTAC). Por lo tanto, los nuevos compuestos dirigidos a XIAP, que presentan una doble función: i) inhibición de la función antiapoptótica de XIAP e ii) inducción de la degradación de proteínas diana, representan un enfoque terapéutico prometedor.
XIAP, al igual que otras proteínas de la familia IAP, contiene dominios BIR que interactúan con el motivo de unión a IAP de proteínas asociadas, como las caspasas. Se ha sugerido que esta interacción regula las actividades proapoptóticas y antiapoptóticas.
La caracterización de compuestos XIAP en los dominios BIR2 y BIR3 permite realizar estudios precisos de perfiles y selectividad.
Cómo funciona
Principio del ensayo
El kit de unión HTRF XIAP BIR2 es un formato de ensayo competitivo que utiliza el ligando de estreptavidina-d2/XIAP BIR2-biotina (basado en el derivado A410099.1), un dominio de unión XIAP BIR2 humano marcado con GST y un anticuerpo anti-GST marcado con criptato de terbio. Los compuestos de unión XIAP compiten con el ligando biotinilado, impidiendo así la FRET.

Protocolo de ensayo
El ensayo del dominio de unión XIAP BIR2 puede realizarse en una placa blanca de bajo volumen de 96 o 384 pocillos (20 µL final). Como se describe aquí, las muestras o el estándar se dispensan directamente en la placa de ensayo. A continuación, se añade el dominio de unión XIAP BIR2 marcado con GST humana, seguido de la dispensación de los reactivos HTRF: el anticuerpo anti-GST marcado con criptato de terbio y el ligando biotinilado/estreptavidina marcado con d2. Los reactivos marcados con fluoróforos HTRF pueden premezclarse y añadirse en un solo paso de dispensación. No se requieren lavados. El protocolo puede miniaturizarse o ampliarse aún más simplemente ajustando proporcionalmente el tamaño de cada volumen añadido. Interacción entre aplicaciones y proteínas.
Compatible con automatización: Sí
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 5 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Ensayo de unión de clase objetivo
Especie objetivo: humanos
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica-Inflamación Neurociencia Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo