Revvity, 64XIAPFLRED, ligando rojo de unión a XIAP/BIR3 humano HTRF

Descripción general
El ligando rojo HTRF XIAP BIR3 se basa en el derivado marcado A410099.1 y está diseñado principalmente para realizar estudios de unión por cooperatividad. Permite calcular la afinidad del ligando rojo XIAP BIR3 por la proteína XIAP BIR3 en presencia de la proteína diana de interés. La Kd del ligando rojo HTRF XIAP BIR3 por la proteína XIAP, tanto en ausencia como en presencia de la proteína diana, permite un análisis preciso del efecto cooperativo evaluado con el kit de unión HTRF XIAP BIR3.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo de unión del ligando XIAP HTRF en el dominio de unión BIR3 de XIAP
La unión del ligando rojo HTRF XIAP BIR3 se detecta mediante un ensayo de unión directa, utilizando un anticuerpo anti-GST-Criptato de Terbio que se une al dominio humano XIAP BIR3 marcado con GST. Cuando los colorantes se encuentran muy próximos, la excitación del donante con una fuente de luz (láser o lámpara de flash) desencadena una transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET) hacia el aceptor, que a su vez fluoresce a una longitud de onda específica (665 nm) (Imagen A). La señal de unión específica se calcula restando la señal de unión no específica de la señal total, lo que permite determinar la Kd del ligando rojo HTRF XIAP BIR3 (Imagen B).

Protocolo de ensayo de unión del ligando rojo HTRF XIAP BIR3
Los experimentos de unión de saturación del ligando HTRF XIAP BIR3-Red se pueden realizar en placas de 384 pocillos dispensando 5 µL de tampón Diluyente 9 (para unión total) o estándar de unión XIAP BIR3 (para unión inespecífica). A continuación, se añaden 5 µL de tampón de unión PROTAC 2 (para referencia) o la proteína diluida en tampón de unión PROTAC 2 (para estudios de cooperatividad), seguidos de 5 µL de proteína XIAP BIR3 marcada con GST. Finalmente, se añaden 5 µL de una solución premezclada de ligando HTRF XIAP BIR3-Red y anticuerpo anti-criptato de tuberculosis GST.
La relación HTRF se mide después de 2 horas de incubación a temperatura ambiente. Compatible con automatización: Sí.
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Grupo de productos: reactivo fluorescente
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica-Inflamación Neurociencia Oncología e Inflamación
Tamaño de la unidad: 1 unidad