Revvity, 64YESY4PEH, kit de detección de fosforilación HTRF humana y de ratón (Tyr426), 10 000 puntos de ensayo

Descripción general
YES, también conocida como YES1, perteneciente a la familia de quinasas Src, es un protooncogén y una tirosina quinasa no receptora localizada en la membrana plasmática. Una vez activada, YES fosforila diversos efectores posteriores, como LATS1/2, YAP, FAK, caveolina-1 y p130CAS, así como Crk. Esta quinasa contribuye a una amplia gama de procesos celulares, como la proliferación celular, la supervivencia, los reordenamientos del citoesqueleto, la migración y la adhesión. La desregulación de YES puede contribuir a la aparición de afecciones patológicas, especialmente en el contexto del cáncer.
Los ensayos HTRF ofrecen muchas ventajas sobre otras tecnologías:

Formato homogéneo de adición y lectura
Sin pasos de lavado
Fondo bajo
Miniaturización sencilla desde microplacas de 96 o 384 pocillos a formatos de ensayo de alta densidad, como placas de 384 pocillos de bajo volumen y de 1536 pocillos.
Señal estable, que proporciona flexibilidad en el tiempo de lectura o tamaño de los ensayos.
Cómo funciona
Principio del ensayo Phospho-YES (Tyr426)
El ensayo fosfo-YES (Tyr426) mide la fosforilación de YES en Tyr26. A diferencia del Western Blot, este ensayo se basa completamente en placa y no requiere geles, electroforesis ni transferencia. Utiliza dos anticuerpos: uno marcado con un fluoróforo donante y el otro con un aceptor. El primer anticuerpo se seleccionó por su unión específica al motivo fosforilado de la proteína, y el segundo por su capacidad para reconocer la proteína independientemente de su estado de fosforilación. La fosforilación de la proteína conduce a la formación de un inmunocomplejo que involucra a ambos anticuerpos marcados, lo que acerca el fluoróforo donante al aceptor, generando así una señal de FRET. Su intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína fosforilada presente en la muestra y permite evaluar el estado de fosforilación de la proteína en un formato de ensayo sin lavado.

Protocolo de ensayo de dos placas de Phospho-YES (Tyr426)
El protocolo de dos placas consiste en cultivar las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis y, posteriormente, transferir los lisados ​​a una placa de detección de bajo volumen de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección HTRF Phospho-YES (Tyr426). Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia de las células.

Protocolo de ensayo de una placa de Phospho-YES (Tyr426)
La detección de YES(Tyr426) fosforilada con reactivos HTRF se puede realizar en una sola placa utilizada para cultivo, estimulación y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado para HTS, permite la miniaturización manteniendo una calidad HTRF robusta. Aplicación: Señalización celular.
Compatible con automatización: Sí
Marca-HTRF
Modalidad de detección-HTRF
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis 4
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 16 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
Objetivo-SÍ
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-TR-FRET
Área terapéutica - Oncología de la inflamación
Tamaño de la unidad: 10 000 puntos de ensayo