Revvity, 81MO2EU1AC, pHSense Eu Fab Anti-Mouse IgG2, 10 x 96 pocillos

Descripción general
El reactivo pHSense™ Eu Fab es un fragmento Fab sensible al pH, marcado covalentemente con europio, diseñado para monitorizar la internalización de anticuerpos o conjugados antifármaco (ADC), así como la mediación por receptores y proteínas de membrana en tiempo real. Se une con alta afinidad a la región Fc de los anticuerpos de prueba, en particular a los subtipos IgG2 de ratón, y presenta una mínima fluorescencia a pH extracelular neutro (≥7). Tras la internalización, el complejo Fab-anticuerpo se encuentra con compartimentos intracelulares cada vez más ácidos, como los endosomas tempranos y tardíos y los lisosomas, donde la señal de europio se intensifica progresivamente. Este novedoso complejo de europio sensible al pH es compatible con la detección de fluorescencia resuelta en el tiempo (TRF), eliminando eficazmente la mayor parte del fondo de fluorescencia y mejorando significativamente la relación señal-fondo. Sus propiedades fotofísicas únicas permiten una detección sencilla y robusta sin lavado de la endocitosis de anticuerpos mediada por receptores en ensayos en placa con células vivas.
Cómo funciona
pHSense Eu Fab Anti-Mouse IgG2: Principio del ensayo de internalización
El reactivo pHSense Eu Fab es un fragmento Fab sensible al pH, marcado covalentemente con europio, diseñado para monitorizar la internalización de anticuerpos o conjugados antifármaco (ADC), así como la mediada por receptores y proteínas de membrana, en tiempo real. Se une con alta afinidad a la región Fc de los anticuerpos de prueba y presenta una fluorescencia mínima a pH extracelular neutro (≥7). Tras la internalización, el complejo Fab-anticuerpo se encuentra con compartimentos intracelulares cada vez más ácidos, como los endosomas tempranos y tardíos y los lisosomas, donde la señal de europio se intensifica progresivamente.

Protocolo de ensayo para monitorizar la internalización de anticuerpos o ADC
El ensayo comienza cultivando células en una placa de 96 pocillos. El anticuerpo o ADC de prueba se preincuba con pHSense Eu Fab en una proporción molar de 1:2 en medio de cultivo celular durante 30 minutos a temperatura ambiente. El complejo resultante se añade a las células y se incuba a 37 °C, seguido de la medición cinética o de fluorescencia de punto final mediante un lector de placas compatible con HTRF.

Protocolo de ensayo para el seguimiento de la internalización mediada por receptores y proteínas de membrana
El ensayo comienza cultivando células en una placa de 96 pocillos. El anticuerpo dirigido contra la diana de interés se preincuba con pHSense Eu Fab en una proporción molar de 1:2 en medio de cultivo celular durante 30 minutos a temperatura ambiente. Esta mezcla se añade a las células y se incuba durante 1 hora a temperatura ambiente. Tras esta incubación, las células se estimulan con un compuesto farmacológico. La fluorescencia se mide cinéticamente o en el punto final utilizando un lector de placas compatible con HTRF. Aplicación: Internalización.
Marca-pHSense
Modalidad de detección: colorante sensible al pH
Grupo de productos: reactivo fluorescente
Volumen de muestra: 50 µL
Condiciones de envío - Envío en hielo seco
IgG2 de ratón objetivo
Clase objetivo: proteínas de superficie celular, anticuerpos, ADC
Especie objetivo: ratón
Tecnología-TRF
Tamaño de la unidad: 10 x 96 pocillos