Revvity, ALSU-APASYN-A-HV, kit de detección de agregados de fosfo-α-sinucleína (Ser129) humana y de ratón AlphaLISA, 100 puntos de ensayo

Descripción general
La alfa-sinucleína (α-Sinucleína) es una proteína pequeña, intrínsecamente desordenada, que se expresa predominantemente en neuronas, en particular en las terminales presinápticas. Desempeña un papel crucial en la función sináptica, el tráfico de vesículas, la liberación de neurotransmisores y la plasticidad sináptica. En su estado normal, la α-Sinucleína existe como un monómero soluble, pero puede plegarse incorrectamente y agregarse en oligómeros, fibrillas y cuerpos de Lewy. Estos agregados son característicos de las sinucleinopatías, como la enfermedad de Parkinson (EP), la demencia con cuerpos de Lewy (DCL) y la atrofia multisistémica (AMS). La α-Sinucleína mal plegada altera la homeostasis celular, deteriora la función sináptica y propaga fibrillas tóxicas entre neuronas de forma similar a la de los priones, lo que provoca neurodegeneración. Las estrategias terapéuticas buscan reducir la agregación de la α-Sinucleína, potenciar su degradación y prevenir su propagación patológica.
El kit de detección de agregados de fosfo-α-sinucleína (Ser129) humana y de ratón AlphaLISA SureFire Ultra es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de agregados de fosfo-α-sinucleína (Ser129) en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.
Formatos:

El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con:

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra se pueden utilizar para:

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado de alto rendimiento para estudios preclínicos
Cómo funciona
Principio del ensayo de agregación de fosfo - AlphaLISA SureFire Ultra
El ensayo de agregación de fosfolípidos AlphaLISA SureFire Ultra mide el nivel de agregados fosforilados de una proteína diana en un lisado celular. Este ensayo utiliza un único anticuerpo fosfoespecífico que reconoce un fosfoepítopo expuesto en la proteína diana agregada, conjugado con una etiqueta CaptSure™ o con biotina. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes.
Las perlas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure para inmovilizar específicamente el anticuerpo marcado con la etiqueta CaptSure. Las perlas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar el anticuerpo biotinilado. En presencia de proteína agregada fosforilada, las perlas donantes y aceptoras se aproximan, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la perla aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de emisión de luz es directamente proporcional a la cantidad de proteína agregada fosforilada presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas de agregación de fosfolípidos: AlphaLISA SureFire Ultra
El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa Optiplate de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Phospho Aggregation-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa para agregación de fosfolípidos: AlphaLISA SureFire Ultra
La detección de la proteína diana agregada con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado para HTS, permite la miniaturización, manteniendo la robusta calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Aplicación: Señalización celular
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra
Modalidad de detección alfa
Kit de grupo de productos
Tiempo de protocolo: 2 h a temperatura ambiente
Volumen de muestra: 30 µL
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Diana-α-sinucleína
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-Alfa
Área terapéutica-Neurociencia
Tamaño de la unidad: 100 puntos de ensayo