Product Description
Descripción general
La AKT, también conocida como proteína quinasa B, es un regulador crucial de diversas funciones fisiológicas, como la transcripción, la apoptosis, el metabolismo de la glucosa y la supervivencia celular. Se ha demostrado que las tres isoformas estrechamente relacionadas de la AKT (AKT1, AKT2 y AKT3) actúan sobre dianas posteriores, tanto comunes como inusuales. Muchos factores desencadenantes pueden provocar la activación de la AKT, momento en el que se libera a la membrana para su fosforilación. La fosforilación de Thr308 por PDK1 y Ser473 por mTORC2 inicia la activación. Posteriormente, la AKT se separa de la membrana y fosforila dianas en el núcleo y el citoplasma celular. La desregulación de la AKT se ha relacionado con afecciones como la diabetes, las cardiopatías y el cáncer.
El kit de detección de fosfo-AKT1 (Ser129) humano y de ratón AlphaLISA SureFire Ultra es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de fosfo-AKT1 (Ser129) en lisados celulares, utilizando tecnología Alpha.
Formatos
El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con
Lisados de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos
Los kits Alpha SureFire se pueden utilizar para
Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado
Cómo funciona
Principio del ensayo Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra
El ensayo Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra mide un objetivo proteico cuando se fosforila en un residuo específico.
El ensayo utiliza dos anticuerpos que reconocen el epítopo fosforilado y un epítopo distal de la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos de detección, que está biotinilado. En presencia de proteína fosforilada, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadora y aceptora, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de emisión de luz es directamente proporcional a la cantidad de fosfoproteína presente en la muestra.
Protocolo de ensayo de dos placas Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra
El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados a una placa OptiPlate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.
Protocolo de ensayo de una placa Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra
La detección de la proteína diana fosforilada con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado para HTS, permite la miniaturización manteniendo la calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Aplicación: Señalización celular
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra
Modalidad de detección alfa
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 10 µL
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-AKT1
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-Alfa
Área Terapéutica-Oncología
Tamaño de la unidad: 500 puntos de ensayo
Order Guidelines
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Collaboration
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