Revvity, ALSU-PFOXO3-A-HV, kit de detección de fosfo-FOXO3A (Ser253) humano y murino AlphaLISA, 100 puntos de ensayo

Descripción general
Forkhead Box O3A (FOXO3A) es un factor de transcripción que regula genes involucrados en la apoptosis, la detención del ciclo celular, la reparación del ADN y la resistencia al estrés. La actividad de FOXO3A está controlada principalmente por la fosforilación mediada por AKT, que promueve su secuestro e inactivación citoplasmática. En condiciones de estrés o con una señalización de AKT reducida, FOXO3A se transloca al núcleo y activa genes diana, incluyendo p21, p27Kip1, Bim y GADD45. FOXO3A funciona como un supresor tumoral al promover la apoptosis y los puntos de control del ciclo celular en respuesta al estrés oncogénico. La pérdida de la actividad de FOXO3A por hiperactivación de AKT contribuye a la progresión del cáncer, la quimiorresistencia y la reprogramación metabólica. Por el contrario, la activación de FOXO3A se asocia con la longevidad y la tolerancia al estrés. Las estrategias terapéuticas apuntan a restaurar la función de FOXO3A mediante la inhibición de AKT o la activación directa de FOXO3A en el tratamiento del cáncer.
AlphaLISA SureFire Ultra Human and Mouse Phospho-FOXO3A (Ser253) es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de fosfo-FOXO3A (Ser253) en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.
Formatos:

El kit HV (alto volumen) contiene reactivos para ejecutar 100 pocillos en formato de 96 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 60 μL.
El kit de 500 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 500 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 10 000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 10 000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.
El kit de 50.000 puntos contiene suficientes reactivos para ejecutar 50.000 pocillos en formato de 384 pocillos, utilizando un volumen de reacción de 20 μL.

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra son compatibles con:

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos

Los kits AlphaLISA SureFire Ultra se pueden utilizar para:

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado de alto rendimiento para estudios preclínicos
Cómo funciona
Principio del ensayo Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra
El ensayo Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra mide un objetivo proteico cuando se fosforila en un residuo específico.
El ensayo utiliza dos anticuerpos que reconocen el epítopo fosforilado y un epítopo distal de la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos de detección, que está biotinilado. En presencia de proteína fosforilada, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadora y aceptora, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de emisión de luz es directamente proporcional a la cantidad de fosfoproteína presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra
El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa OptiPlate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra
La detección de la proteína diana fosforilada con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado para HTS, permite la miniaturización manteniendo la calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Aplicación: Señalización celular
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra
Modalidad de detección alfa
Tiempo de protocolo: 2 h a temperatura ambiente
Volumen de muestra: 30 µL
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-FOXO3A
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-Alfa
Área terapéutica-Neurociencia Oncológica
Tamaño de la unidad: 100 puntos de ensayo