Revvity, ALSU-PMEK1-A-HV, AlphaLISA SureFire Ultra Kit de detección de fosfo-MEK1 (Ser218/222) humana y de ratón, 100 puntos de ensayo

Descripción general
La proteína quinasa 1 activada por mitógenos (MEK1) es una quinasa de doble especificidad que desempeña un papel fundamental en la vía de señalización MAPK/ERK, la cual regula procesos celulares clave como la proliferación, la diferenciación y la supervivencia. La activación de MEK1 se produce mediante la fosforilación en Ser218 y Ser222, lo cual es esencial para la activación posterior de ERK1/2. La señalización aberrante de MEK1 está implicada en diversos tipos de cáncer y trastornos del desarrollo, lo que la convierte en un objetivo crítico para la intervención terapéutica y el análisis de vías.
El kit de detección de fosfo-MEK1 (Ser218/222) humano y de ratón AlphaLISA SureFire Ultra es un inmunoensayo tipo sándwich para la detección cuantitativa de fosfo-MEK1 (Ser218/222) en lisados ​​celulares, utilizando tecnología Alpha.
En el ensayo AlphaLISA™ SureFire® Ultra™, las microesferas donantes se recubren con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos, que está biotinilado. Las microesferas aceptoras se recubren con un agente patentado CaptSure™ que inmoviliza el otro anticuerpo, marcado con una etiqueta CaptSure™. En presencia de proteína fosforilada, los dos anticuerpos acercan las microesferas donantes y aceptoras, generando una señal. La cantidad de emisión de luz es directamente proporcional a la cantidad de fosfoproteína presente en la muestra.
Los kits AlphaLISA™ SureFire® Ultra™ son compatibles con:

Lisados ​​de células y tejidos
Moduladores de anticuerpos
Anticuerpos bioterapéuticos

Los kits Alpha SureFire® se pueden utilizar para:

Ensayos de quinasas celulares
Estudios de activación de receptores
Cribado
Cómo funciona
Principio del ensayo Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra

El ensayo Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra mide un objetivo proteico cuando se fosforila en un residuo específico.

El ensayo utiliza dos anticuerpos que reconocen el epítopo fosforilado y un epítopo distal de la proteína diana. Los ensayos AlphaLISA requieren dos tipos de microesferas: aceptoras y donantes. Las microesferas aceptoras están recubiertas con un agente patentado CaptSure™ para inmovilizar específicamente el anticuerpo específico del ensayo, marcado con una etiqueta CaptSure. Las microesferas donantes están recubiertas con estreptavidina para capturar uno de los anticuerpos de detección, que está biotinilado. En presencia de proteína fosforilada, los dos anticuerpos acercan las microesferas donadora y aceptora, por lo que el oxígeno singlete transfiere energía para excitar la microesfera aceptora, lo que permite la generación de una señal alfa luminiscente. La cantidad de emisión de luz es directamente proporcional a la cantidad de fosfoproteína presente en la muestra.

Protocolo de ensayo de dos placas Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra

El protocolo de dos placas implica el cultivo y tratamiento de las células en una placa de 96 pocillos antes de la lisis, y la posterior transferencia de los lisados ​​a una placa OptiPlate™ de 384 pocillos antes de añadir los reactivos de detección Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra. Este protocolo permite monitorizar la viabilidad y la confluencia celular. Además, los lisados ​​de un solo pocillo pueden utilizarse para medir múltiples dianas.

Protocolo de ensayo de una placa Phospho-AlphaLISA SureFire Ultra

La detección de la proteína diana fosforilada con los reactivos AlphaLISA SureFire Ultra se puede realizar en una sola placa, utilizada para cultivo, tratamiento y lisis. No requiere lavado. Este protocolo, diseñado para HTS, permite la miniaturización manteniendo la calidad de AlphaLISA SureFire Ultra.
Aplicación: Señalización celular
Compatible con automatización: Sí
Marca AlphaLISA SureFire Ultra
Vía celular o de señalización-MAPK
Modalidad de detección alfa
Compatibilidad del tampón de lisis: tampón de lisis
Modificación molecular-fosforilación
Kit de grupo de productos
Volumen de muestra: 30 µL
Condiciones de envío - Envío en Blue Ice
Objetivo-MEK1
Clase objetivo: fosfoproteínas
Especie objetivo: ratón humano
Tecnología-Alfa
Tamaño de la unidad: 100 puntos de ensayo